凍存管 貼標(biāo)機(jī)|凍存管貼標(biāo)機(jī)
液氮罐、掛屜、凍存管、移液槍、超凈臺
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文章目錄:
一、在菌種傳代培養(yǎng)時,要用到哪些儀器設(shè)備?具體一些...工作菌株和儲存菌株...
所需儀器設(shè)備:
1、電子天平(幾千元),或托盤天平(幾百元):用于稱量各配方原料;
2、pH計(幾千元),或pH試紙(幾元):用于給培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH值。
3、電磁爐(兩三百元),或電爐(幾十元):用于加熱溶解培養(yǎng)基或滅活菌種;
4、高壓蒸汽滅菌器(最小的幾百元即可):用于培養(yǎng)基和接種器具的滅菌;
5、超凈臺(單人的兩千元左右),或無菌室(這個成本可就大了):用于無菌操作;
6、接種環(huán)(十幾元),或移液器(幾百到上萬):用于菌種的各項操作如接種、傳代等;
7、培養(yǎng)箱或搖床或培養(yǎng)間(千元左右到幾萬元不等):用于菌種的培養(yǎng);
8、冰箱(一兩千),或超低溫冰箱(幾萬元):用于菌種的短期或長期保存。
所需耗材:凍存管、試管、移液器吸嘴、燒杯、三角瓶、玻璃棒、棉塞、紗布、棉繩等。
工作菌株:一般數(shù)量較多,作為日常使用菌種,保存條件相對較低,保存時間相對較短,一般在數(shù)周到一年,可直接擴(kuò)大培養(yǎng);
儲存菌株:一般數(shù)量較少,作為保存使用菌種,保存條件相對較高,保存時間相對較長,一般在一年到數(shù)十年,使用前需要經(jīng)過活化或純化。
液氮罐、掛屜、凍存管、移液槍、超凈臺
二、細(xì)胞培養(yǎng)常用器材有哪些?
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎(chǔ)的技術(shù),細(xì)胞培養(yǎng)液的設(shè)計一直是細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵。生物幫那里有文檔細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑的作用和準(zhǔn)備方法??梢匀タ匆幌隆?體外培養(yǎng)細(xì)胞使用的器材品種較多。由于離體細(xì)胞對各種毒物都很敏感,所以細(xì)胞培養(yǎng)所用器材的清洗、消毒處理是培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵之一。
一、玻璃器材
常用的玻璃器材有各種規(guī)格的玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、吸管、離心管等。
無論是初次使用還是培養(yǎng)后重復(fù)使用的玻璃器材均需要進(jìn)行消毒處理。首次使用的玻璃器材應(yīng)先用自來水初步刷洗,然后用稀鹽酸溶液(1%)浸泡過夜,再用自來水沖洗,最后處理方法與重復(fù)使用的器皿的處理。
重復(fù)使用的玻璃器皿的處理步驟:
(1)刷洗。用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)中性洗滌劑刷洗,去除器皿內(nèi)外表面的雜質(zhì)。刷洗時注意不要用力過重,以防損壞器皿內(nèi),影響細(xì)胞生長;也不能留有死角。器皿數(shù)量大時,可使用超聲波清潔裝置,沖洗干凈后晾干。
(2)清潔液處理。將刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重鉻鉀清潔液中。清潔液配方如下,見表3-1:
表3-1 清 潔 液 配 方
名 稱清 潔 液 濃 度
25%(弱液)50%(次強(qiáng)液)75%(強(qiáng)液)
1000g1000g1000g
濃 硫 酸2500mL5000mL7500ML
蒸餾水(或廢液)7500Ml5000mL2500mL
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該清潔液具有高度腐蝕性,操作時必須穿長筒膠靴,戴防酸橡皮手套,圍裙和眼鏡,以防清潔液濺出而灼傷。在配液時還需注意將酸緩慢放入水中,以防酸遇水放熱產(chǎn)生酸濺出或使玻璃及陶制容器裂開而使清潔液外泄。切勿將水加入酸中,以防酸濺出。常用清潔液為75%和50%兩種。
將玻璃器皿放入時最好裝入塑料網(wǎng)袋內(nèi),再浸入清潔液中,玻璃瓶內(nèi)不要殘留氣泡。一般浸泡12~24小時后取出。在清潔液中取出的器皿先用自來水沖洗10次以上,再用單蒸水沖洗三次以上,最后用雙蒸水(或去離子水)沖洗1~2次,晾干,包裝殺菌。一般用121℃磅高壓蒸氣滅菌20分鐘。玻璃濾器使用后及時用自來水沖洗濾器表面的剩余物,然后用單蒸水浸泡,除去濾板內(nèi)堵塞雜物,若用濾膜則將濾膜丟棄,加4N鹽酸浸泡12小時以上,用自來水沖洗,再用單蒸水抽濾2次,雙蒸水(或去離子水)抽濾沖洗、包裝、121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。也可用5%潔消精浸泡20分鐘后,再按上述方法沖洗和滅菌。
二、塑料器材
體外培養(yǎng)細(xì)胞中塑料器皿的使用越來越多,有進(jìn)口的,也有國產(chǎn)的。主要有多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶及吸嘴。多孔培養(yǎng)板有4孔、6孔、24孔、96孔等規(guī)格可供選擇。多數(shù)為進(jìn)口產(chǎn)品,已消毒滅菌密封包裝,使用時只需打開即可。
有一次性使用的,也有反復(fù)使用的。在我國不少實驗室,由于經(jīng)費有限,經(jīng)過清洗和消毒滅菌再使用的較多。
塑料器皿若使用后,先用自來水浸泡沖洗、晾干,再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡過夜,用自來水充分沖洗,或先用2%NaOH處理之后再用3%HCl浸泡30分鐘,最后用自來水沖洗干凈,并用雙蒸水沖洗3次以上,晾干。消毒采用直接照射或輻照滅菌辦法。清洗時要防止產(chǎn)生劃痕,以免影響細(xì)胞的貼附性。所以,培養(yǎng)要求較高的細(xì)胞的塑料器材,最好一次性使用。
三、橡皮器材
應(yīng)選擇質(zhì)軟、耐高溫、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)做各種瓶或試管的塞子、蓋子。新購置的橡皮制品,用自來水沖洗去除其表面粉粒和污物。先用5%煮沸15分鐘,用自來水沖洗8次,再用4%鹽酸煮沸15分鐘,用自來水沖洗8次,單蒸水沖洗3次,雙蒸水(或去離子水)沖洗一次,晾干后包裝或置于鋁盒內(nèi),用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。
已用過的橡皮制品,先用自來水沖洗干凈,然后用洗衣粉加熱煮沸10分鐘后,用自來水邊沖邊用力攪動,以充分洗凈殘余洗衣粉,然后用蒸餾水煮沸2次,每次15分鐘,再用單蒸水沖洗2次,必要時還要用雙蒸水(或去離子水)沖洗一次,晾干后包裝或放于鋁盒內(nèi),用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。
四、金屬器材
細(xì)胞培養(yǎng)中需用多種金屬器材,用于解剖、取材、剪切組織及持取物件等,常用的有剪刀、鑷子、手術(shù)刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號針頭等。新的金屬器材,先用紙擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,或用1%煮沸15分鐘,擦干后再用95%酒精紗布擦干,包裝或置鋁盒內(nèi)于121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。
已用過的金屬器材,及時用酒精棉球擦干凈,包裝入鋁盒內(nèi)于121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。
五、其他物品
紗布先用自來水洗凈后,再用單蒸水沖洗,然后用單蒸水煮沸2次,每次15分鐘,并經(jīng)常用長鑷子翻動,再用單蒸水洗2次,晾干后折成八層包裝,用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。
注射器的針頭使用后,立即用自來水(或來蘇爾水)沖洗數(shù)次,沖洗出針頭內(nèi)的剩余物,以免堵塞針頭,然后用單蒸水洗2~3次,再用95%酒精沖洗3次,包裝或置鋁飯盒內(nèi)121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。
用于細(xì)胞培養(yǎng)過程中的各種人工合成培養(yǎng)液、緩沖液和酶濾液等也需要進(jìn)行除(滅)菌處理。緩沖液常用高壓蒸氣消毒。血清用56℃水浴滅活30分鐘。人工合成培養(yǎng)液等酶溶液用過濾除菌。安裝濾器時要防止濾膜裝偏而導(dǎo)致過濾失效,過濾時力量不能過大、過猛,以免濾膜破裂。濾液量多,用抽濾式或加壓式(正壓式)過濾裝置。濾液量少,可選用2.5cm直徑的小號濾器,直接套在小瓶(如瓶)上,以注射器推動壓力過濾。
消毒滅菌前所用的包裝材料可用牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒和特制玻璃(或金屬)消毒筒等,可根據(jù)器材大小、形態(tài)選用,采取局部包裝或部分包裝,并用線繩扎緊。
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